從植物葉片提取的植物總蛋白不但是家養類動物生長發育的重要營養物質，而且是具有潛力的新一代營養保健食品，因而掌握植物葉蛋白的提取方法至關重要，讓我們一起了解這整個實驗原理和過程吧。

一、實驗目的

熟悉植物葉蛋白的幾種提取原理和方法，了解其意義及其應用價值。

二、實驗原理

植物葉蛋白或稱綠色蛋白濃縮物(leaf protein concentration，簡稱LPC)，是從新鮮植物葉片中提取的高質量濃縮蛋白質，不僅是畜禽生長發育和生物試劑畜產品的主要營養物質，而且目前也正成為人類的保健營養理想食品之一。天然蛋白存在于為數甚多的植物體內，對其分離應依據人們的利用目的及提取蛋白含量和品質加以考慮。

天然蛋白質一般在溶液中呈穩定的親水膠體狀態，故LPC 亦稱葉蛋白膠。其特點是：

(1)水化作用 即蛋白質分子表面附有能有效防止蛋白質分子沉淀析出的水化膜;(2)電荷排斥作用 水化膜外還有電荷層(具陰、陽離子)能有效地防止蛋白質分子的凝集。故溶液蛋白質顆粒(溶質)呈溶解狀態;(3)欲提取植物組織中的蛋白質必須利用溶解度的差異進行分離純化(如鹽析、有機溶劑分級沉淀法、疏水層析、結晶、加熱、離心分離等法)，利用分子大小和形狀差異進行分離純化(分子篩層析法);還可利用電荷性質的差異分離純化(離子交換法)。只要創造上述影響因素，即可使蛋白質從植物葉片中分離并沉淀出來。

植物葉蛋白提取一般遵循如下基本原則：盡可能提高樣品蛋白的溶解度，抽提zui大量的總蛋白，減少蛋白質的損失;減少對蛋白質的人為修飾;破壞蛋白與其他生物大分子的相互作用，并使蛋白質處于*變性狀態。根據該原則，植物葉蛋白制備過程中一般需要有四種試劑①離液劑：尿素和硫脲等;②表面活性劑：又稱去垢劑，早期常用NP-40、Tritonx-100等非離子型去垢劑，離子型去垢劑有SDS、膽酸鈉、LiDS 等，還有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以凍存)與Zwittergent 等雙性離子去垢劑;

③還原劑：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等;④蛋白酶抑制劑及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制劑混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如為了去除緩沖液中存在的痕量重金屬離子，可在其中加入0.1～5mmol/LEDTA，同時使金屬蛋白酶失活。

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